女性向け恋愛ゲームを原作に、土方をメインにしたルートをアニメ化。史実の事件を描く一方、新選組が抱える重大な秘密など独自の設定も多く、先が読めない展開が魅力。
連絡がつかない蘭学医の父を探し、男装して京へやってきた雪村千鶴。そこで化け物に襲われた千鶴は、新選組幹部の土方歳三たちに助けられ、屯所で暮らすことに。斎藤一や沖田総司たち隊士と打ち解けていく千鶴だが、新選組にはある大きな秘密があり…。
文久3年、冬。父の行方を捜して京の都にやって来た雪村千鶴は、血を求める化け物に襲われそうになる。千鶴に迫る化け物を斬り伏せたのは“人斬り集団”と恐れられる新選組の幹部たち…土方、沖田、斎藤だった。
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父･綱道を捜すという名目で新選組の屯所で暮らすことになった千鶴は、次第に隊士たちとも打ち解けていく。屯所に来てから半年後、やっと巡察にも同行させてもらえるようになるが、千鶴は騒動に巻き込まれてしまう。
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山南の命を受け土方たちの元へひた走る千鶴。その頃、近藤たちは既に勤王の志士たちが会合する池田屋に踏み込んでいた。そこで沖田と藤堂は、ただならぬ気配を漂わす怪しげな2人の浪士に遭遇し一戦を交えるが…。
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池田屋への討ち入りから一月、京には長州藩兵たちが集結していた。藩兵を追い返すため新選組も出陣する。斎藤は蛤御門、原田は公家御門、土方は天王山へと分かれる中、3人は薩摩や長州に与する者たちに出会う。
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近藤らが江戸で行った隊士募集に応じ、伊東が新選組に入隊する。総長でありながら剣客の道を絶たれていた山南は、伊東が参謀の座に就いたことで身の置き場をなくしてしまう。千鶴はそんな山南を気に掛けるが…。
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綱道が改良したいという薬を飲み、人ならざる者へと変貌する山南。土方は伊東派から山南の存在を隠すため、西本願寺への屯所移転を断行する。移転後、江戸より帰京した藤堂は父親捜しの進まない千鶴を励ますが…。
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二条城に現れた風間、天霧、不知火は自らを“鬼”と名乗り、千鶴を連れ去ろうとする。駆け付けた土方、斎藤、原田によって千鶴は窮地を脱するものの、風間たちの残した言葉は謎に包まれたままだった。
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風間から綱道の動向を聞いた千鶴は、父が新選組と敵対する勢力にいるのではないかと思い悩む。元気のない千鶴を心配する永倉や原田たち。時は過ぎ、京で制札を引き抜く事件が相次ぎ、新選組は制札警護の任を受ける。
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京を離れていた風間が再び上洛。伊東は何者かと密会し、怪しい動きを見せ始める。ある日、羅刹となった隊士が千鶴に襲い掛かる事件が起き、伊東は近藤たちに「新選組から分離し、御陵衛士を拝命する」と告げる。
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風間の襲撃によって、不動堂村への屯所移転を余儀なくされた新選組。間もなく大政奉還が成立するが、坂本暗殺の嫌疑が原田に掛かるなど、その波紋はやがて大きなうねりとなって新選組を襲い始める。
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